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主營產(chǎn)品:不銹鋼過濾系統(tǒng),紅外線接種環(huán)滅菌器,浮游菌采樣器,脈沖震蕩樣品前處理器,數(shù)字化智能電熱鼓風(fēng)干燥箱,數(shù)字化智能電熱恒溫培養(yǎng)箱,實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及環(huán)境溫濕度監(jiān)測系統(tǒng),潔凈工作臺(tái)等實(shí)驗(yàn)設(shè)儀器設(shè)備。
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    軍團(tuán)菌檢測方法

    發(fā)布時(shí)間: 2014-02-28  點(diǎn)擊次數(shù): 2389次

       軍團(tuán)菌是一種環(huán)境感染性致病菌,可引起急性呼吸道傳染病,即軍團(tuán)菌病。軍團(tuán)菌分布極其廣泛,醫(yī)院、酒店等的供水系統(tǒng)、空調(diào)的冷卻系統(tǒng)等各種水源均易于滋生、污染軍團(tuán)菌,并造成軍團(tuán)菌病傳染的風(fēng)險(xiǎn)。即與水有關(guān)的地方均可能存在軍團(tuán)菌。

      軍團(tuán)菌傳播、感染有以下特點(diǎn):

    1、透過空氣、水份感染,傳播帶季節(jié)性,超過50%病例在夏季發(fā)生。

    2、滋生在醫(yī)院、酒店的供水系統(tǒng),通過過水、浴室傳播。

    3、可通過空調(diào)的冷卻系統(tǒng),由通風(fēng)口傳播并感染對(duì)象。

      軍團(tuán)菌屬革蘭氏陰性桿菌,專性需氧,無芽孢,無莢膜,軍團(tuán)菌需要半胱氨酸和鐵,無半胱氨酸時(shí),軍團(tuán)菌無法生長。生化特征還有不發(fā)酵也不氧化糖類,不還原硝酸鹽,氧化酶實(shí)驗(yàn)陰性或弱陽性,尿素酶陰性,軍團(tuán)菌生長的zui適pH為6.9-7.0,2%-5%CO2能促進(jìn)部分菌株的生長。軍團(tuán)菌生長緩慢,易于被其它菌落覆蓋。軍團(tuán)菌的菌落顏色多樣,通常呈白色、灰色、藍(lán)色或紫色,也能顯深褐色、灰綠色、深紅色。菌落整齊,表面光滑,在紫外燈下,有熒光。目前軍團(tuán)菌分為64種血清型及42個(gè)種。

     二、軍團(tuán)菌的檢測方法---ISO11731:1998 

    1.范圍

     本標(biāo)準(zhǔn)描述了一種用于軍團(tuán)菌分離和估計(jì)環(huán)境樣品中軍團(tuán)菌數(shù)量的培養(yǎng)方法。該方法適用于所有環(huán)境樣本,包括飲用水、工業(yè)用水和天然水以及沉淀物、沉積物和粘土/軟泥等相關(guān)樣本。

    2.培養(yǎng)基和試劑

    2.1:CP0020 BCYE平板(軍團(tuán)菌生長平板)                 

    2.2:P0030 BCYE-CYS平板(BCYE無L-半胱氨酸平板)      

    2.3:CP0040 GVPC選擇性平板(軍團(tuán)菌選擇性平板)       

    2.4:酸處理緩沖液

    3.取樣

    3.1取樣容器

    水樣可采用玻璃、聚乙烯或類似容器。以前用過的容器應(yīng)該清洗干凈、扣干水分,121℃高壓滅菌15min。如果容器不能經(jīng)受高壓滅菌,應(yīng)在高于70℃的流動(dòng)熱水或流動(dòng)蒸汽中處理至少5min。

    3.2含生物防腐劑的樣品

    如果水樣中含有或被認(rèn)為含有氧化型生物防腐劑,應(yīng)在取樣時(shí)或取樣前加入非活性試劑加以中和。如果水樣中含有消毒劑,需在采樣前或采樣后加入中和劑,含氯或氧化型消毒劑可用流代流酸鈉或硫代硫酸鉀作中和劑。原則上講,實(shí)驗(yàn)室接到水樣后應(yīng)盡快進(jìn)行微生物學(xué)分析,是取樣當(dāng)天,尤其對(duì)于已知含生物防腐劑的樣品。因此,建議從樣品采集到制備好濃縮樣的間隔為2d,不應(yīng)超過5d,zui長不超過14d。

     3.3樣品運(yùn)輸

    樣品應(yīng)在6-18℃條件下被運(yùn)輸,應(yīng)避免熱和光照,在1d內(nèi),不超過2d將樣品送到實(shí)驗(yàn)室。

    4.制樣

    4.1 總則

    如果液體樣品軍團(tuán)菌的數(shù)量估計(jì)超過105CFU/L,可以采用直接平板法,即直接涂布于GVPC平板。為了確保低于這個(gè)數(shù)量樣品中軍團(tuán)菌的檢測,需采用濃縮技術(shù)。為了濃縮水樣,可采用膜過濾法(4.2)或離心法(4.3)。

    4.2膜過濾法

    如果樣品是渾濁的、乳濁的或有顏色的,應(yīng)采用離心法。采用MFS型膜過濾裝置進(jìn)行膜過濾,采用直徑47mm,孔徑0.22μm和0.45μm的無菌白底黑格膜。過濾后的膜應(yīng)放置在帶蓋的無菌容器中,可用無菌剪刀剪碎,加5ml-25ml的無菌稀釋液或無菌去離子水,不斷搖動(dòng)至少2min。也可將容器放入超聲波中2-10min。

    4.3.離心法

    取200ml樣品于300-500ml容積的離心瓶中,6000g離心10min或3000g離心30min,保持溫度在15-25℃,棄去上清液,將沉淀物懸浮在2-20ml無菌稀釋液或無菌去離子水中。

    培養(yǎng)

    5.1.將制備好的樣品(濃縮的或未濃縮的)分成3份,1份不做任何處理;1份進(jìn)行熱處理;1份進(jìn)行酸處理。

    5.2熱處理加1±0.5ml樣品于一無菌容器中,50±1℃水浴處理30±2min。

    5.3.酸處理:加1-10ml樣品于一擰蓋的容器中,6000g離心10min或3000g離心30min,用無菌槍頭吸去一半體積的上清液,通過渦旋重新懸浮剩余物用酸處理緩沖液補(bǔ)足原始體積。混合靜置5±0.5min。

    5.4.革蘭氏染色:團(tuán)菌生長較慢,次日生長的菌落可直接棄去。軍團(tuán)菌菌落顏色多樣,通常呈白色、灰色、藍(lán)色或紫色,也能顯深褐色、灰綠色、深紅色。菌落整齊,表面光滑,在紫外燈下有熒光。軍團(tuán)菌為革蘭氏陰性桿菌。

    5.4.菌落驗(yàn)證:從每個(gè)平皿上選幾個(gè)可疑菌落,接種BCYE、BCYE-Cys平板和血平板進(jìn)行傳代培養(yǎng),凡在BCYE平板上生長,而在BCYE-Cys平板上不生長的菌極可能是軍團(tuán)菌。

    5.5.軍團(tuán)菌計(jì)數(shù):從三個(gè)GVPC平板中選擇確證菌數(shù)zui多的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),再除以濃縮倍數(shù),作為軍團(tuán)菌數(shù)的估計(jì)值。

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